A. 液相的正相色譜柱可以用甲醇沖洗嗎
塗覆型的柱子所用的流動相一般為正己烷/異丙醇,或者正庚烷/異丙醇的混合物。
其中有幾種柱子是可以用甲醇沖洗的,比如AD, AS, OD, OJ柱。
但要注意的是不同流動相之間的切換需要用異丙醇作為過渡。
一旦使用了甲醇、乙醇、乙腈等極性溶劑做流動相,最好一直使用極性流動相。
對於塗覆型的固定相,DMF、DMSO、二氧六環、甲苯、四氫呋喃、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯, 絕對不能用作流動相,它們會不可逆的破壞柱子。
B. 何為正相色譜及反相色譜在應用上有何特點
正相色譜是一種液固吸附色譜,其柱填料為具有活性吸附點的吸附劑。溶劑和溶質分子能夠吸附在這些活性中心上,使得分離過程得以實現。正相色譜的應用特點是,它使用全多孔型的微球型或無定型硅膠作為填充材料,特別是球形硅膠,因其具有良好的滲透性和較低的操作壓力,從而在穩定性方面表現出色。
反相色譜則是一種流動相極性大於固定相極性的色譜技術。它特別適用於分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸、甾體、脂類、脂肪酸、碳水化合物和生物鹼等含有非極性基團的物質。反相色譜中常用的有機溶劑包括甲醇和乙腈,而乙醇、四氫呋喃、異丙醇和二氧六環等常被用作改性劑。有機溶劑的梯度變化也會影響解析度,通常情況下,梯度越小,解析度越高。
在正相色譜中,保留機理類似於吸附過程,即極性樣品分子和溶劑分子會被吸附在柱填料表面的極性基團上。對於常用的氰基、氨基或二醇基固定相柱,吸附中心通常是鍵合配體或硅烷。而在使用硅膠時,吸附位點則為硅烷醇(一SiOH)。這種特殊的保留機制使得正相色譜在處理極性化合物時表現出色。
反相色譜介質的穩定性較高,分離效率也很高,因此在生物化學、葯物分析和蛋白質組學等領域得到了廣泛應用。而正相色譜則因其良好的滲透性、較低的操作壓力和穩定性,更適用於分離極性較強的化合物。
總的來說,正相色譜和反相色譜在應用上有各自的特點和優勢,它們在不同的領域中發揮著重要作用。選擇哪種色譜方法,主要取決於需要分離的化合物的性質及其在特定應用中的需求。